محیط کشت RPMI 1640

محیط کشت RPMI 1640 کاربردهای محتلفی در کشت سلول‌های پستانداران دارد، در فرمت‌های دارای گلوتامکس (GlutaMAX)، دارای L-Glutamine، دارای معرف فنول رد (Phenol Red) و نیز فاقد فنول رد در بافر HEPES فرموله شده است.

مواد اولیه RPMI 1640

TM NaHCO3, GlutaMax,NaHco3 HEPES

محیط کشت RPMI 1640: راهنمای جامع برای تحقیقات سلولی و کشت بافت

محیط کشت RPMI 1640 یکی از اساسی ترین محیط های کشت در آزمایشگاه های زیست شناسی سلولی و تحقیقات پزشکی است. این محیط که توسط موسسه Roswell Park Memorial Institute توسعه یافته، به طور ویژه برای کشت سلول های خونساز و سیستم ایمنی طراحی شده است. در این راهنمای جامع، به بررسی ترکیبات، کاربردها، روش آماده سازی و نکات کلیدی استفاده از این محیط کشت پرکاربرد میپردازیم.

ترکیبات و ویژگی های فیزیکوشیمیایی

فرمولاسیون پایه RPMI 1640

• اسیدهای آمینه: حاوی تمام اسیدهای آمینه ضروری و غیرضروری
• ویتامین ها: شامل B12، فولیک اسید، بیوتین و نیاسین آمید
• کربوهیدرات ها: گلوکز (2 گرم در لیتر)
• نمک های معدنی: کلسیم نیترات، منیزیم سولفات، پتاسیم کلرید
• بافرها: بیکربنات سدیم (2.0 گرم در لیتر)
• شاخص pH: فنل رد (معمولاً 5-10 میلیگرم در لیتر)

ویژگی های فیزیکی

• رنگ: قرمز نارنجی (در pH 7.4)
• اسمولاریتی: ~300 mOsm/kg
• pH بهینه: 7.0-7.4 (در 5% CO2)

کاربردهای اصلی در تحقیقات بیولوژیکی

1. تحقیقات هماتولوژی و ایمونولوژی

• کشت لنفوسیت های T و B
• مطالعات روی سلول های مونوسیتی
• تحقیقات لوسمی و لنفوم

2. تولید آنتی بادی مونوکلونال

• کشت سلولهای هیبریدوما
• تولید آنتیبادیهای درمانی

3. تحقیقات سرطان

• کشت سلول های سرطانی خون
• آزمایش های حساسیت دارویی

4. مطالعات ویروس شناسی

• کشت سلول های میزبان برای تکثیر ویروس
• تحقیقات ایدز و هپاتیت

روش آماده سازی و نگهداری

تهیه محیط از پودر

1. حل کردن محتویات ویال در آب دیونیزه (معمولاً 10.4 گرم در لیتر)
2. همزدن کامل تا حل شدن کامل پودر
3. تنظیم pH به 7.4 با HCl یا NaOH 1N
4. فیلتراسیون استریل با فیلتر 0.22 میکرون
5. افزودن مکملها (FBS، آنتی بیوتیک ها، گلوتامین)

شرایط نگهداری

• محیط پایه: 2-8°C تا 6 ماه
• محیط مکمل شده: 2-8°C تا 1 ماه
• پودر خشک: دمای اتاق (15-30°C)

مکمل های ضروری و غلظت های توصیه شده

مزایای کلیدی RPMI 1640

✅ بهینه برای سلولهای سوسپانسیونی
✅ فرمولاسیون متعادل برای مطالعات طولانی مدت
✅ سازگاری با انواع سلولهای خونساز
✅ پشتیبانی از رشد سلولهای اولیه و خطوط سلولی

نکات فنی و عیب یابی

مشکلات رایج و راه حل ها

• تغییر رنگ به زرد: نشانه اسیدی شدن – تعویض محیط یا افزایش بافر
• کاهش رشد سلولی: بررسی کیفیت FBS و گلوتامین
• آلودگی: استفاده از آنتی بیوتیک/ضدقارچ مناسب

بهترین روش های کاربردی

• گرم کردن محیط به 37°C قبل از استفاده
• اجتناب از انجماد و ذوب مکرر محیط مکمل شده
• کنترل منظم pH و اسمولاریتی

مقایسه با سایر محیط های کشت

سوالات متداول

1. آیا RPMI 1640 برای کشت سلولهای چسبنده مناسب است؟

بله، اما ممکن است نیاز به اصلاحاتی مانند افزایش درصد FBS داشته باشد.

2. چرا از RPMI در تحقیقات سرطان خون استفاده میشود؟

به دلیل فرمولاسیون بهینه برای متابولیسم سلول های خونساز و لنفوسیتی.

3. تفاوت RPMI 1640 و RPMI 1788 چیست؟

RPMI 1788 برای کشت لنفوسیت های محیطی بهینه شده است.

جمع بندی و توصیه های نهایی

محیط کشت RPMI 1640 با بیش از 50 سال سابقه استفاده، همچنان یکی از پایه های اصلی تحقیقات سلولی محسوب میشود. برای دستیابی به بهترین نتایج:

1. از مکملهای با کیفیت بالا استفاده کنید
2. شرایط نگهداری را دقیقاً رعایت نمایید
3. برای کاربردهای خاص، فرمولاسیون را بهینه سازی کنید